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科研服务

DNA合成

DNA合成简介

Oligo DNA的人工化学合成始于50年代初期,1980年,全自动的固相DNA合成仪面市后,使得快速、高效合成Oligo DNA成为可能,这极大地推动了生物工程技术的蓬勃发展。随着生物工程技术发展,人工合成Oligo DNA的需求量越来越大,已经成为分子生物学实验中最基础的试剂之一。而合成Oligo DNA的质量,将会直接影响科研人员实验计划的顺利进行。因此, 使用高质量的合成Oligo DNA制品变得尤为重要。


我公司合成Oligo DNA制品有如下特点:

1、高质量合成。使用进口试剂,合成高质量的DNA制品。

2、高纯度纯化。推出脱盐纯化、PAGE纯化、HPLC纯化三种级别制品,客户可根据实验需要选择。三分快3保证对每个制品都进行严格的质量管理。

3、完善的数据。制品包装中附有制品相关的多种数据,包括:合成的原始数据,A、G、C、T各碱基的分布情况,分子量,OD数,nmol数等,使用方便。



DNA合成的原理

现在一般都采用亚磷酰胺化学合成Oligo DNA片段,具有高效、快速偶联以及起始反应物比较稳定的特点。该方法是在固相载体上完成DNA链的合成的,合成时从3"→5"方向进行,通常3"端的第一个碱基结合在Glass担体(Controlled Pore Glass,CPG)上。Oligo DNA合成的原理基本相同,主要差别在于合成产率的高低、试剂消耗量和单个循环用时的不同。我公司采用的合成仪主要机型为ABI3900高通量合成仪。

合成的详细过程见图1,现简要说明如下:



图1 Oligo DNA合成原理图。N1代表第一个碱基,N2代表第二个碱基,依次类推。



第一步三氯乙酸和预先连接在固相载体(CPG)上的第一个核苷酸反应(其活性基团处于被保护状态),脱去核苷酸5‘-羟基的保护基团DMT,获得游离的5‘-羟基;
第二步活化新的碱基单体(Phosphoramidite),准备与第一个碱基进行反应;
第三步合成DNA的原料(亚磷酰胺保护的核苷酸单体)与活化剂四氮唑混合,得到核苷亚磷酸活化中间体,它的3‘端被活化,5‘-羟基仍然被DMT保护,与溶液中游离的5‘-羟基发生缩合反应;
第四步带帽(capping)反应,缩合反应中可能有极少数5‘-羟基没有参加反应(少于2%),用乙酸酐和1-甲基咪唑终止其后继续发生反应,这种短片段可以在纯化时分离掉;
第五步在氧化剂碘的作用下,亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。(即将三价磷氧化成五价磷) (重复进行Step1~Step5的循环,直至合成完所需的Oligo DNA序列)
第六步合成结束后,将Oligo DNA分子从CPG上切下,再进行进一步的纯化。


合成过程中可以观察TCA处理阶段的颜色判定合成效率。连接在CPG上的引物被切下来,通过, PAGE等手段纯化引物,成品引物用C18浓缩、脱盐,测定OD260定量,根据定单要求分装。


DNA合成项目表


(一)常规合成(≤60bp)

片段长度

纯化方式

规格

单价(/碱基)

发货周期(工作日)

1540bp

OPC

2-5 OD

¥1.20

2

10 OD

¥1.80

2

30 OD

¥4.00

3

50 OD

¥8.00

3

15-60bp

PAGE

2 OD

¥1.60

3

5 OD

¥1.80

3

10 OD

¥2.20

3


(二)长链合成(>60bp)

片段长度

纯化方式

规格

单价(/碱基)

发货周期(工作日)

6180bp

PAGE

2 OD

¥4.00

3

5 OD

¥6.50

3

10 OD

¥8.00

3

81-100bp

PAGE

1 OD

¥8.00

3


(三)硫代修饰(SPO3)

量(OD)

发货时间(工作日)

纯化方式

单价(¥)

2

4

PAGE

8.00/base

5

4

PAGE

12.00/base

10

4

PAGE

15.00/base

30以上

待询

PAGE

询价


(四)特殊碱基

种类

产量(OD)

发货时间

纯化方式

单价(元/碱基)

dI

2

4

PAGE

80

5

4

PAGE

120

dU

2

4

PAGE

100

5

4

PAGE

140

5甲基化dC

2

4

PAGE

300

5溴dU

2

4

PAGE

300


(五)修饰/标记引物

分类

修饰/标记

纯化方式

2 OD

5 OD

10 OD

磷酸基团(Phosphorylation)

5" PO4

HPLC

¥200.00

¥300.00

¥400.00

3" PO4

HPLC

¥300.00

¥350.00

¥500.00

NH2修饰(Amino Linkers)

5" or 3" NH2 C3

HPLC

¥450.00

询价

询价

5" NH2 C6

HPLC

¥200.00

¥300.00

¥450.00

3" NH2 C7

HPLC

¥200.00

¥300.00

¥450.00

5" NH2 C12

HPLC

¥450.00

¥600.00

¥800.00

5" NH2 C6 dT

HPLC

¥500.00

¥700.00

¥1,000.00

3" NH2 C6 dT

HPLC

¥350.00

¥500.00

¥800.00

SH 修饰 (Thiolation)

3" SH C3

HPLC

¥350.00

¥480.00

¥600.00

5" SH C6

HPLC

¥400.00

¥500.00

¥800.00

Spacers

Spacer C3

HPLC

¥280.00

¥350.00

¥500.00

Spacer C6

HPLC

¥280.00

¥350.00

¥500.00

Spacer 9

HPLC

¥280.00

¥350.00

¥500.00

Spacer 18

HPLC

¥400.00

¥500.00

¥800.00

dSpacer

HPLC

¥500.00

¥700.00

¥1,000.00

生物素(Biotin)

5" Biotin

HPLC

¥300.00

¥350.00

¥500.00

3" Biotin

HPLC

¥350.00

¥400.00

¥600.00

5" Biotin TEG

HPLC

¥700.00

询价

询价

3" Biotin TEG

HPLC

¥600.00

询价

询价

5" Dual Biotin

HPLC

¥1,800.00

询价

询价

5" or Internal Biotin dT

HPLC

¥700.00

¥900.00

¥1,500.00

5" PC Biotin

HPLC

¥1,800.00

询价

询价

地高辛(Digoxin)

5" or 3" Digoxin

HPLC

¥600.00

¥800.00

¥1,200.00

荧光基团(Fluorophores)

5" Cy3

HPLC

¥1,200.00

¥1,500.00

¥2,500.00

3" Cy3

HPLC

¥1,300.00

¥1,600.00

¥2,600.00

Internal Cy3

HPLC

¥1,400.00

询价

询价

5" Cy5

HPLC

¥1,100.00

¥1,500.00

¥2,500.00

3" Cy5

HPLC

¥1,000.00

¥1,800.00

¥2,600.00

Internal Cy5

HPLC

¥1,400.00

询价

询价

5" FAM

HPLC

¥280.00

¥320.00

¥450.00

3" FAM

HPLC

¥300.00

¥350.00

¥500.00

5" HEX

HPLC

¥450.00

¥600.00

¥900.00

5" TET

HPLC

¥450.00

¥600.00

¥900.00

5" 6-JOE

HPLC

¥550.00

¥650.00

¥900.00

3" 6-JOE

HPLC

¥550.00

¥700.00

¥1,000.00

5" Rox

HPLC

¥500.00

¥600.00

¥900.00

3" Rox

HPLC

¥550.00

¥700.00

¥1000.00

5" TAMRA

HPLC

¥450.00

¥600.00

¥850.00

3" TAMRA

HPLC

¥500.00

¥650.00

¥950.00

5" FITC

HPLC

¥300.00



3" FITC

HPLC

¥350.00



Internal TAMRA

HPLC

¥1000.00

询价

询价

淬灭基团(Quenchers)

3" DABCYL

HPLC

¥750.00

¥900.00

¥1,200.00

3" BHQ 1

HPLC

¥600.00

¥800.00

¥1,100.00

3" BHQ 2

HPLC

¥600.00

¥800.00

¥1,100.00

电化学标记(Electrochemicals)

Ferrocene

HPLC

¥550.00

¥700.00

¥1,000.00

其它

电询


(六)双标记荧光探针

分类

标记

纯化方式

2 OD

5 OD

10 OD

3" TAMRA

5" FAM-3" TAMRA

2次HPLC纯化

¥1,000.00

¥1,200.00

¥1,800.00

5" HEX-3" TAMRA

2次HPLC纯化

¥1,400.00

¥1,600.00

¥2,000.00

5" TET-3" TAMRA

2次HPLC纯化

¥1,400.00

¥1,600.00

¥2,000.00

5" JOE-3" TAMRA

2次HPLC纯化

¥1,400.00

询价

询价

3" DABCYL

5" FAM-3" DABCYL

HPLC

¥1,000.00

¥1,200.00

¥1,800.00

5" HEX-3" DABCYL

HPLC

¥1,200.00

¥1,400.00

¥2,000.00

5" TET-3" DABCYL

HPLC

¥1,200.00

¥1,400.00

¥2,000.00

5" JOE-3" DABCYL

HPLC

¥1,300.00

询价

询价

5" TAMRA-3" DABCYL

HPLC

¥1,400.00

询价

询价

5" Cy5-3" DABCYL

HPLC

¥1,300.00

¥1,600.00

¥2,000.00

3" BHQ1

5" FAM-3" BHQ1

HPLC

¥1,000.00

¥1,200.00

¥1,450.00

5" HEX-3" BHQ1

HPLC

¥1,200.00

¥1,400.00

¥1,800.00

5" JOE-3" BHQ1

HPLC

¥1,100.00

询价

询价

BHQ2

5" ROX-3" BHQ2

HPLC

¥1,000.00

¥1,300.00

¥1,800.00

ECLIPSE

5" FAM-3" ECLIPSE

HPLC

¥1,000.00

¥1,200.00

¥1,800.00

5" HEX-3" ECLIPSE

HPLC

¥1,000.00

询价

询价

5" TET-3" ECLIPSE

HPLC

¥1,200.00

询价

询价

5" JOE-3" ECLIPSE

HPLC

¥1,100.00

询价

询价

5" TAMRA-3" ECLIPSE

HPLC

¥900.00

¥1,200.00

¥1,800.00

5" Rox-3" ECLIPSE

HPLC

¥900.00

¥1,200.00

¥1,800.00

其它

电询


(七)、简并碱基及代码

简并代码MRWSYKVHDBN
代表碱基A/CA/GA/TC/GC/TG/TA/C/GA/C/TA/G/TC/G/TA/C/G/T